摘要: 旨在制备鸡转化生长因子β1（Transforming growth factor β1， TGF‑β1）的多克隆抗体。首先，以马立克病病毒转化的T淋巴细胞系MSB1细胞的mRNA为模板，通过RT‑PCR技术扩增鸡TGF‑β1基因的完整CDS区，将其连接至原核表达载体pET‑32a（+）中，构建重组表达质粒pET‑32a‑TGF‑β1；随后，将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21中进行诱导表达，采用亲和层析法对表达蛋白进行纯化；接着，利用免疫家兔制备多克隆抗体，并通过间接ELISA检测抗体效价，通过Western blot技术和间接免疫荧光检测来评价多克隆抗体的特异性。结果表明，重组原核表达质粒pET‑32a‑TGF‑β1构建成功，经IPTG诱导后获得约65 kDa的重组蛋白；免疫家兔获得TGF-β1抗血清，ELISA检测显示抗体效价达1∶640 000；Western blot结果证实，该抗血清能特异性识别目的蛋白；间接免疫荧光结果显示，该多克隆抗体能很好地识别TGF‑β1阳性细胞。综上，本研究制备出的兔抗鸡TGF‑β1多克隆抗体，可用于鸡TGF‑β1的检测。